鶏のポーク アヒル96 WellsのためのMQCA診断ELISAのキット/キットの感受性0.5 Ppb

MQCA ELISA テスト キット チキン ポーク ダック用 96 ウェル/キット 感度 0.5 ppb

 

1.原則

この検査キットは、サンプル中の MQCA を検出するための競合酵素イムノアッセイに基づいています。カップリング抗原は、マイクロウェルストライプにプレコートされています。サンプル中の MQCA と、マイクロウェル ストライプ上にプレコートされた結合抗原が、抗 MQCA 抗体をめぐって競合します。酵素コンジュゲートの添加後、着色のためにTMB基質を添加する。サンプルの光学密度 (OD) 値は、MQCA と負の相関があります。この値は標準曲線と比較され、その後 MQCA 濃度が取得されます。

 

2. 技術仕様

感度:0.5ppb
インキュベーター温度：25℃
インキュベーター時間：30分～15分

検出限界:
組織 1 ppb

交差反応率:
MQCA 100%
オラキンドックス <0.1%
回収率：
組織 85%±10%

 

3. コンポーネント

 

1	マイクロウェルストリップ	それぞれ8つの取り外し可能なウェルを備えた12個のストリップ
2	6×標準液（各1mL）	0ppb	0.5ppb
		1.5ppb	4.5ppb
		13.5ppb	40.5ppb
3	濃縮酵素コンジュゲート	1ml	赤い帽子
4	抗体作業溶液	8ml	ブルーキャップ
5	基板A	7ml	白い帽子
6	基板B	7ml	ブラックキャップ
7	ソリューションを停止	7ml	黄色い帽子
8	再溶解液	50ml	透明キャップ
9	20×濃縮洗浄バッファー	40ml	白い帽子

 

4. 必要だが提供されていない資料

1) 使用機材：マイクロプレートリーダー（450nm/630nm）、ホモジナイザー、オシレーター、遠心機、メスピペット、窒素乾燥装置、天秤（感度逆数0.01g）、インキュベーター。
2) マイクロピペッター: シングルチャンネル 20 ～ 200 μL および 100 ～ 1000 μL およびマルチチャンネル 30 ～ 300 μL;
3) 試薬：酢酸エチル、n-ヘキサン、HCl、NaCl、CH3CN

 

5. サンプルの前処理

指示
あらゆる種類のサンプルを前処理する前に、次の点に対処する必要があります。
1) 使い捨てチップのみが実験に使用でき、異なる試薬を吸収するために使用する場合はチップを交換する必要があります。
2) 実験の前に、実験結果を妨げる汚染を避けるために、各実験器具がきれいであることを確認し、必要に応じて再洗浄する必要があります。

サンプル準備
1) サンプル抽出物 (2~8℃で 1 ヶ月保存): 8.6ml の濃塩酸を取り、脱イオン水を加えて 500ml にし、10g の NaCl を加えてサンプル抽出物を得る。

5.1家畜および家禽の組織（鶏肉、鴨、豚肉）：
1. ホモジナイズしたサンプル 2 ± 0.05 g を 50 ml 遠心チューブに採取します。
2. 4 mL のサンプル抽出液を加え、1 分間よく振とうします。
3. 酢​​酸エチル 4ml と CH3CN 2ml を加え、10 秒間よく振ってください。室温（20 ～ 25 ℃）で 4000 r/min で 10 分間遠心分離します（注：このステップは 10 秒間のみ振とうする必要があります。長時間振とうすると乳化が起こります。乳化が見られた場合は、一定の上清を取り、チューブを 5 秒間軽く振ってください）。 、再度遠心すると、十分な上清を得ることができます);
4. 上層有機相 3 mL を透明な容器に取り、その下で窒素または空気で乾燥させます。
56℃ウォーターバス;
5. 1ml の N-ヘキサンを加え、30 秒間振とうし、次に 0.5ml の再溶解溶液を加え、振とうし、30 秒間完全に混合します。室温（20～25 ℃）、4000 r/min で 5 分間遠心分離します。
6. 上層の有機相を除去します。下層を 50 µL 採取して分析します。
サンプルの希釈倍率：0.5

 

6. ELISA手順

6.1 指示
1) 使用前にすべての試薬とマイクロウェルストリップを室温 (20 ～ 25 ℃) に戻します。
2) すべての試薬は、使用後すぐに 2 ～ 8 ℃ に戻します。
3) ELISA分析の再現性は、プレート洗浄の一貫性に大きく依存します。プレート洗浄の正しい操作は、ELISA の手順の重要なポイントです。
4) 一定温度でのインキュベーションでは、すべてのサンプルと試薬が光にさらされないようにする必要があり、各マイクロプレートはカバー膜で密閉する必要があります。

6.2 操作手順
1) 必要な試薬をすべて取り出し、室温 (20 ～ 25 ℃) で 30 分以上放置します。各試薬は、使用前に振って均一に混合する必要があることに注意してください。
2) 必要なマイクロウェル ストリップとプレート フレームを用意します。未使用のマイクロプレートを再密封し、2～8℃で保存。
3) 溶液の調製: 40 mL の 20 倍濃縮洗浄バッファーを脱イオン水で 1:19 (20 倍濃縮洗浄バッファー 1 部 + 脱イオン水 19 部) で希釈するか、必要な量を調製します。
4) 番号付け: サンプルおよび標準溶液に従ってマイクロウェルに番号を付けます。各サンプルと標準溶液は、重複して実行する必要があります。彼らの位置を記録します。
5) 抗体作業溶液と濃縮酵素コンジュゲートの混合溶液を調製します。抗体作業溶液と濃縮酵素コンジュゲートを 10:1 で均等に混合します (1000ul 抗体作業溶液 + 100ul 濃縮酵素コンジュゲート。保管する場合、パッケージ数量に余分な量がありますが、割合で準備してください.)
6) 20 μL のサンプルまたは標準溶液を別々の 2 つのウェルに加え、次に抗体作業溶液と濃縮酵素コンジュゲートの混合溶液 70 μL を各ウェルに加えます。軽く振って混合し、マイクロプレートをカバーメンブレンで密閉し、25℃、暗所で 30 分間インキュベートします。
7) マイクロプレートを洗浄バッファーで 250 μL/ウェルで 4 ～ 5 回洗浄します。ウェルを洗浄バッファーに 15 ～ 30 秒間浸し、フラップを吸収紙で乾かします (フラップ後に気泡がある場合は、きれいな先端で切り取ります)。
8) 着色: 50 μL の基質 A 溶液と 50 μL の B 溶液を各ウェルに加えます。軽く振り混ぜ、25℃暗所で 15 分間インキュベートして発色させる。
9) 測定: 50 μL の停止液を各ウェルに加えます。軽く振って混ぜます。マイクロ プレート リーダーの波長を 450 nm に設定して、OD 値を決定します。(2 波長 450/630 nm で 5 分以内に OD 値を読み取ることをお勧めします)。

 

7. 結果判定

結果を判断する方法は 2 つあります。前者は大まかな判断であり、後者は定量的な判断です。サンプルの OD 値は、MQCA の含有量と負の相関があることに注意してください。

7.1 定性的決定
濃度範囲 (ng/mL) は、サンプルの平均 OD 値と標準溶液の平均 OD 値を比較することで得られます。試料ⅠのOD値を0.3、試料ⅡのOD値を1.0とすると、標準液のOD値は0ppbで2.043、0.5ppbで1.716、1.5ppbで1.215、4.5で0.74となります。 ppb、13.5 ppb では 0.313、40.5 ppb では 0.155 であるため、サンプルⅠの濃度範囲は 13.5 ～ 40.5 ppb、サンプルⅡの濃度範囲は 1.5 ～ 4.5 ppb です。

7.2 定量的測定
吸光度値の平均値は、サンプルと標準溶液の平均 OD 値 (B) を最初の標準溶液 (0 標準) の OD 値 (B0) で割り、100% を掛けた値のパーセンテージに相当します。 、 あれは、

 

吸光度値のパーセンテージ =	B	×100%
	B0

 

 

B—サンプルまたは標準溶液の平均 (ダブルウェル) OD 値
B0—0 ng/mL 標準溶液の平均 OD 値
標準溶液の吸収率と MQCA 標準溶液の半対数値 (ng/mL) をそれぞれ Y 軸と X 軸として標準曲線を描きます。標準曲線に吸収率を組み込むことにより、標準曲線からサンプルの対応する濃度を読み取ります。得られた値は、その後、対応する希釈倍数で乗算され、最終的にサンプル中の MQCA 濃度が得られます。
このキットの専門的な分析ソフトウェアを使用すると、大量のサンプルを正確かつ迅速に分析するのに便利です。(このソフトウェアについてはお問い合わせください)

 

8. 注意事項

1. 室温が 25 ℃ 未満の場合、または試薬とサンプルの温度が室温 (20 ～ 25 ℃) に戻されていない場合、標準 OD 値は低くなります。
2. 洗浄工程でのマイクロプレートの乾燥は、標準曲線が非線形で再現性が悪いなどの状況を伴います。
3. すべての試薬と反応混合物を均一に混合し、マイクロプレートを十分に洗浄します。そうしないと、望ましくない再現性が生じます。
4. 停止液は 2 M 硫酸溶液です。皮膚に触れないようにしてください。
5. 未使用のマイクロプレートをオートシール袋に入れて再シールします。標準物質と無色の発色剤は感光性があるため、直接光にさらすことはできません。
6. 有効期限を過ぎたキットは使用しないでください。キットの希釈または粗悪​​な試薬を使用すると、感度および検出 OD 値が変化します。ロット番号の異なるキットの試薬を入れ替えて使用しないでください。
7. この溶液の変性を示す色の着色溶液を廃棄します。0.5未満の0標準液の検出値は、その変性を示します
8. 反応温度は25℃が最適で、温度が高すぎても低すぎても検出感度やOD値が変化します。

 

9. 保管と賞味期限

保存方法：冷凍せずに2～8℃で保存してください。
有効期限：12ヶ月。製造日は箱にあります。
注: マイクロプレートの真空パッケージに漏れがある場合でも、使用は有効です。テスト結果には影響しません。リラックスして使用してください。

 

 

 

 

 

Q1: いつ発送されますか?
A1: ご入金確認後、7営業日以内に発送いたします。（疫病などの外的要因により、お届けが遅れる場合がございます）

 

Q2: OEM/ODM をサポートしていますか?
A2: サポート可能ですが、特定の数量が 100,000 個以上である必要があり、カスタマイズされた製品に便利です。

 

Q3: あなたの工場は品質管理に関してどのようにやっていますか?
A3: ISO9001とISO13485の国家認証を取得しています。当社の製造プロセスは、最適な製品品質を確保するための標準手順に準拠しています。

 

Q4: どのようにアフターサービスを提供しますか?
A4: 私達は専門のオンライン技術的な売り上げ後のサービスを提供します。ビデオや電話などでマンツーマンでご案内いたします。

 

Q5：支払い方法は？
A5: お支払いはT/Tで承っております。

 

Q6: 発送方法は？
A6: 多くの提携運送業者から見積もりを取得して、最適な配送方法を選択し、お客様の要件に従って発送します。