ミルクの食品安全性の感受性96Wells/KitのためのエビのNitrofuran AMOZ 0.03ppb診断ELISAのキット

牛乳感受性のニトロフラン AMOZ 診断 ELISA キット 0.03ppb 96 ウェル/キット

 

1.診断 ELISA キット原理

この検出キットは、サンプル中の AMOZ を検出するための競合酵素イムノアッセイに基づいています。結合した抗原は、マイクロウェル ストリップにあらかじめコーティングされています。サンプル中の AMOZ は、抗 AMOZ 抗体を求めて、マイクロウェル ストリップにプレコートされた結合抗原と競合します。酵素複合体を添加した後、染色のためにTMB基質を添加します。サンプルの光学密度 (OD) 値は、その中の AMOZ と負の相関があります。この値は標準曲線と比較され、その後 AMOZ 濃度が取得されます。

 

2. 技術仕様

 

感度: 0.03ppb

インキュベーション温度：25℃

インキュベーション時間：30分～15分

検出限界 組織、卵、蜂蜜：0.1ppb

交差反応率

アモズ 100%

AHD < 0.1%

AOZ < 0.1%

SEM < 0.1%

回収率

組織 80 ± 25%

はちみつ 75±25%

卵 95 ± 25%

 

3.ニトロフラン AMOZ ELISA 食品安全性試験キットコンポーネント

 

1	マイクロウェルストリップ	12 ストリップ、8 ストリップは取り外し可能 それぞれの井戸
2	6×標準液（各1mL）	0ppb	0.03ppb
		0.09ppb	0.27ppb
		0.81ppb	2.43ppb
3	酵素複合体	7ml	赤い帽子
4	抗体作業溶液	7ml	ブルーキャップ
5	基板A	7ml	白い帽子
6	基板B	7ml	ブラックキャップ
7	ソリューションを停止	7ml	黄色い帽子
8	20×濃縮洗浄バッファー	40ml	白い帽子
9	2×濃縮再溶解液	50ml	透明キャップ
10	2-ニトロベンズアルデヒド (C7H5NO3)	2-ニトロベンズアルデヒド (C7H5NO3)	2-ニトロベンズアルデヒド (C7H5NO3)

 

 

4. 必要だが提供されていない資料
1) 設備: マイクロプレートリーダー、プリンター、ホモジナイザー、窒素乾燥機、ボルテクサー、遠心分離機、測定管、はかり(逆数 0.01g)、インキュベーター、ウォーターバス;
2) マイクロピペット: シングルチャンネル 20-200µL、100-1000µL、マルチチャンネル 30-300µl;
3) 試薬: NaOH、酢酸エチル、n-ヘキサン、HCl (約 36.5%)、K2HPO4・3H2O

5. サンプル調製

指示する
あらゆる種類のサンプル前処理の前に、次の点に対処する必要があります。
1) 実験では使い捨てチップのみを使用でき、異なる試薬を吸引するときはチップを交換する必要があります。
2) 実験の前に、実験結果に干渉する汚染を避けるために、必要に応じて各実験装置を洗浄および再洗浄する必要があります。

サンプル前処理前の溶液調製:
1) 0.1 M K2HPO4: 11.4 g の K2HPO4 3H2O を脱イオン水に溶解して 500 mL にします。
2) 1 M HCl: 8.6 mL の HCl (約 36.5%) を脱イオン水に溶解して 100 mL にします。
3) 1 M NaOH: 4 g の NaOH を脱イオン水に溶かして 100 mL にします。
4) サンプルを再溶解するために、濃縮再溶解溶液を脱イオン水で 1:1 (濃縮再溶解溶液 1 mL + 脱イオン水 1 mL) で 2 倍に希釈します。

 

5.1 サンプル調製

a)組織、 卵
1) 均質なサンプル 1±0.05g を量り、蒸留水 4mL、1M HCl 0.5mL、2-ニトロベンズアルデヒド (C7H5NO3) 100μL を各チューブに加え、2 分間適切に振とうします。
2) 37°C で一晩 (約 16 時間) または 56°C のウォーターバスで (2 時間) インキュベートします。
3) 0.1M K2HPO4 5mL、1M NaOH 0.4mL、酢酸エチル 6mL を各チューブに加え、30 秒間振とうします。
4) 室温（20～25℃）、4000r/min 以上で 10 分間遠心する（乳化がある場合、または酢酸エチル層が 3ml 未満の場合は、サンプルを 80℃のウォーターバスで 10 分間インキュベートし、遠心する）繰り返し、または速度を上げて遠心時間を延長します)。
5) 酢酸エチル層 3 mL を新しい遠沈管に移し、窒素または空気で 50°C で蒸発乾固します。
6) 乾燥残渣を n-ヘキサン 2 mL に溶解し、希釈した原液 1 mL を加えて 30 秒間よく混合し、室温 (20～25℃) で 4000 rpm 以上の速度で 10 分間遠心する。分;上の n-ヘキサン相を取り除きます。(乳化が発生した場合は、上部の n-ヘキサン相を取り除き、サンプルを 70°C のウォーターバスで 10 ～ 20 分間インキュベートし、遠心分離を繰り返します)。
7) 分析のために下層を 50 μL 採取します。
サンプル希釈倍率: 2

b) はちみつ
1) 均一なサンプル (蜂蜜) 2±0.05g を秤量し、4mL の蒸留水、0.5mL の 1 M HCl、および 100 μL の 2-ニトロベンズアルデヒド (C7H5NO3) を各チューブに加え、2 分間適切に振とうします。
2) 37°C で一晩 (約 16 時間) または 56°C のウォーターバスで (2 時間) インキュベートします。
3) 0.1M K2HPO4 5mL、1M NaOH 0.4mL、酢酸エチル 6mL を各チューブに加え、30 秒間振とうします。
4) 室温 (20 ～ 25°C) で 4000r/min 以上の速度で 10 分間遠心分離します (乳化がある場合、または酢酸エチル層が 3ml 未満の場合は、サンプルを 80°C のウォーターバスで 10 分間繰り返し遠心分離します。または速度を上げて遠心時間を長くします）。
5) 酢酸エチル層 3 mL を新しい遠沈管に移し、窒素または空気で 50°C で蒸発乾固します。
6) 乾燥残渣を n-ヘキサン 2 mL に溶解し、希釈還元液 1 mL を加えて 30 秒間よく混合し、室温 (20～25℃) で 4000 r/min 以上の速度で遠心分離する。 10分;上の n-ヘキサン相を取り除きます。(乳化が発生した場合は、上部の n-ヘキサン相を取り除き、サンプルを 70°C のウォーターバスで 10 ～ 20 分間インキュベートし、遠心分離を繰り返します)。
7) 分析のために下層を 50 μL 採取します。
サンプル希釈係数: 1

 

 

6. ELISA手順

6.1 説明
1) 使用前にすべての試薬とマイクロウェル ストリップを室温 (20 ～ 25 °C) に戻します。
2) すべての試薬は、使用後すぐに 2～8°C に戻します。
3) ELISA アッセイの再現性は、プレート洗浄の一貫性に大きく依存します。プレート洗浄の正しい操作は、ELISA 手順の鍵です。
4) 恒温培養中は、すべてのサンプルと試薬を光から保護し、各マイクロプレートをカバー フィルムで密閉する必要があります。

6.2 操作手順
1) キットを室温 (20 ～ 25°C) で 30 分以上置きます。各試薬は使用前によく振って混合し、必要なマイクロウェル ストリップをプレート フレームに入れます。未使用のマイクロプレートは再密封し、冷凍せずに 2 ～ 8°C で保存してください。
2) 溶液の調製: 脱イオン水で 1:19 に希釈した 20 × 濃縮洗浄バッファー 40 mL (1 部の 20 × 濃縮洗浄バッファー + 19 部の脱イオン水)。または、必要に応じて準備してください。
3) 番号付け: サンプルと標準溶液に従ってマイクロウェルに番号を付けます。各サンプルと標準溶液を複製して作成し、それらの位置を記録する必要があります。
4) 50 μL のサンプルまたは標準溶液を別の複製ウェルに追加します。50ul の酵素複合体を各ウェルに加え、次に 50µL の抗体作業溶液を加え、プレートを手で振って穏やかに混合します。マイクロプレートをカバーフィルムで密閉し、25℃で 30 分間インキュベートします。
5) マイクロウェルに液体を注ぎ、吸収紙の上で軽くたたいて乾かし、250 μL/ウェルの洗浄バッファーを加えてマイクロウェルプレートを 15 ～ 30 秒間洗浄し、取り出して吸収紙で軽くたたいて乾かすことを 4 ～ 5 回繰り返します。（タッピング後に気泡がある場合は、きれいなチップで切り取ってください）。
6) 発色: 50 μL の基質 A を各ウェルに加え、続いて 50 μL の基質 B を加えます。プレートを手で振って穏やかに混合し、25 °C の暗所で 15 分間インキュベートして発色させます。
7) アッセイ: 50 μL の停止液を各ウェルに加えます。手でプレートを振って穏やかに混合します。マイクロ プレート リーダーの波長を 450 nm に設定して、各ウェルの OD 値を決定します。(2 波長 450/630nm で 5 分以内に OD 値を読み取ることをお勧めします)。

 

7. 結果判定

 

結果の判定には、ざっくりとした判定と定量的な判定の2つの方法があります。サンプルの OD 値は、AMOZ 濃度と負の相関があることに注意してください。

7.1 定性的決定

AMOZ の濃度範囲 (ng/mL) は、サンプルの平均 OD 値と標準溶液の平均 OD 値を比較することで求めることができます。サンプルⅠのOD値を0.3、サンプルⅡのOD値を1.0とすると、標準液のOD値は、0ppbで2.243、0.03ppbで1.816、0.09ppbで1.415、0.27ppbで0.74、0.81ppbで0.313となります。 、2.43ppb に対して 0.155 であるため、サンプルⅠの濃度範囲は 0.81 ～ 2.43ppb、サンプルⅡの濃度範囲は 0.09 ～ 0.27ppb です。

7.2 定量的測定

吸光度の平均値は、サンプルと標準溶液の平均 OD 値 (B) を最初の標準溶液 (0 標準) の OD 値 (B0) で割り、100% を掛けて得られます。 、

吸光度値のパーセンテージ =	B	×100%
	B0

B—サンプルまたは標準溶液の平均 OD 値

B0—0 ng/mL 標準溶液の平均 OD 値

標準液の吸光度を Y 軸、X 軸に AMOZ 標準液の片対数値 (ng/mL) を用いて検量線を描きます。標準曲線に吸収率を組み込むことにより、標準曲線からサンプルの対応する濃度を読み取ります。得られた値は、その後、対応する希釈倍数で乗算され、最終的にサンプル中の AMOZ 濃度が得られます。

 

8. 注意事項
1) 室温が 25℃より低い、または試薬温度とサンプルが室温 (20 ～ 25℃) に戻っていない場合、標準 OD 値が低下します。
2) 洗浄プロセス中、マイクロ プレートの乾燥は、標準曲線の非線形性と不十分な再現性を伴います。したがって、洗浄後すぐに次のステップに進んでください。
3) よく混ぜないと再現性が悪くなります。
4) 停止液は 2 M 硫酸溶液です。皮膚に触れないようにしてください。
5) 有効期限を過ぎたキットは使用しないでください。キットの試薬を希釈または混ぜて使用すると、感度および検出 OD 値が変化する可能性があります。キットの異なるバッチの試薬を交換しないでください。
6) 未使用のマイクロプレートをセルフシールバッグに再密封します。標準溶液とカラーレス カプラーは感光性があり、直接光を当てることはできません。
7) 溶液が劣化したことを示す色の着色溶液は廃棄してください。標準液 1（0 ppb）の検出値が 0.5 未満の場合は劣化しています。
8) 反応至適温度は25℃で、温度が高すぎても低すぎても検出感度やOD値が変化します。
 

9. 保管および有効期間
保管: 2～8℃で保管し、凍結しないでください。
有効期限: 12 か月;製造日は箱にあります。
注：マイクロプレートの真空包装が漏れても、検査結果に影響なく使用できますので、安心してご使用いただけます。

 

 

Q1: いつ発送されますか?
A1: ご入金確認後、7営業日以内に発送いたします。（疫病などの外的要因により、お届けが遅れる場合がございます）

 

Q2: OEM/ODM をサポートしていますか?
A2: サポート可能ですが、特定の数量が 100,000 個以上である必要があり、カスタマイズされた製品に便利です。

 

Q3: あなたの工場は品質管理に関してどのようにやっていますか?
A3: ISO9001とISO13485の国家認証を取得しています。当社の製造プロセスは、最適な製品品質を確保するための標準手順に準拠しています。

 

Q4: どのようにアフターサービスを提供しますか?
A4: 私たちは専門的なオンライン技術アフターサービスを提供しています.ビデオや電話などでマンツーマンでご案内いたします。

 

Q5：支払い方法は？
A5: お支払いはT/Tで承っております。

 

Q6: 発送方法は？
A6: 多くの協力運送業者から見積もりを取得して、最適な配送方法を選択し、お客様の要件に従って発送します。