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サンプル性能: | ヒツジおよびヤギの血清そして血しょう | 方法: | 競争ELISA方法 |
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キー ワード: | PPRV Ab ELISAのキット | 指定: | 96人のWells/キット |
保存性: | 12か月 | 店: | 暗いの2~8℃、凍結する |
ハイライト: | Petitsの反芻動物の獣医の診断キット,PPRVの獣医の診断キット,PPRV Ab ELISAのキット |
Petitsの反芻動物のOvineのための獣医の診断キットPPRV Ab ELISAのキット
Ovine Wells/キット96のためのPeste Des Petitsの反芻動物のウイルス(PPRV) Ab ELISAのキット
1. 使用法
ヒツジおよびヤギの血清そして血しょうのPPRVの抗体を質的に検出したり、Peste desのpetitsの反芻動物ワクチンの免疫の状態および感染させた動物の助けられた血清学の診断を評価することを使用する。
2. 主義
このキットの使用競争ELISA方法、PPRVの抗原は酵素のマイクロよストリップでプリコートされる。PPRのウイルスの特定の抗体があればテストした場合、薄くされた血清のサンプルを加えれば版の抗原にMonoclonal酵素の共役、孵化の後で、コーティングの版のPPRVの抗原に結合し、酵素分類されたモノクローナル抗体が不良部分ことを防ぐ;サンプルがPPRV特定の抗体を含まなければ逆に、コーティングの版に結合しない。自由な抗体および他の部品を取除く洗浄の後で酵素の触媒作用によって青いプロダクトを形作るためにmicrowellsに基質を加えなさい。停止解決を反作用を終えるために加えた後吸光度を反作用の価値よく測定するのに450nm/630nm倍の波長でmicroplateの読者を使用しなさい。
3. キットの部品
1 | PPRVの抗原はmicroplateに塗った | 96T X 2 | |
2 | 酵素の共役 | 12ml | 黄色いふた |
3 | サンプル希薄 | 25ml | 透明なふた |
4 | PPRV-IgG否定的な制御血清 | 1ml | 緑のふた |
5 | PPRV-IgG肯定的な制御血清 | 1ml | 赤いふた |
6 | 基質 | 12ml X2 | オレンジふた |
7 | 解決を停止しなさい | 12ml | 青いふた |
8 | 10×concentrated洗浄緩衝 | 50ml | 白いふた |
9 | 付着力ホイル | 2部分 | |
10 | 指示 | 1部分 |
4. 必要な材料は提供しなかった
1) Micropipette:0.5-10ul、10ul-100ul、100ul-1000ul。
2)使い捨て可能なピペットの先端。
3)卒業生:500ml.
4) Microplateの読者:450/630nm波長の96の井戸。
5)蒸留水か脱イオンされた水。
6) Microplateの洗濯機
5. サンプル準備
動物の全血を、得る規則的な方法の使用によって血清を明るいもし、溶血無し、血清取りなさい。
6. 洗浄の緩衝準備
塩の水晶があれば、使用の前の室温への帰り10Xによって集中された洗浄緩衝は5~10minのための37の℃の湯せんにそれから10時に脱イオンされた水とそれを薄くするためにそれを分解するようにそれを置いた(例えば、200ml洗浄緩衝を準備するため:脱イオンされた水+ 10Xの20mlの180mlは洗浄緩衝を、均等に混合するそれを集中した)。薄くされた洗浄の緩衝は週についての4℃forで貯えることができる。
7. ノート
1) すべての試薬を室温に使用の前に戻しなさい、少なくとも30分の室温にすべての試薬を置きなさい。使用の前にそれ、および2-8℃after使用法に戻って店を均等に揺すりなさい。
2)は異なったキットからの使用試薬を混合しないし、使用するとき別のロットNOは、試薬を汚されて防ぐ。
3)基質および停止解決は皮に苛立ちがあるかもしれ、目は、使用するように気を付ける。
4)は強いライト--に基質をさらさないし、オキシダントが付いている接触を避けない。
5) PPRV Agは版に密封され、moisture-proofべきである塗った。MicroWellの背部未使用の版を乾燥したホイル袋に入れ、2-8 ℃で密封した。
放棄する前に汚染を避けるために6)すべての無駄はよく扱われるべきである。
7)操作指示を含む厳密な承諾は最もよい結果を得ることができる。操作を、全プロセスのタイミング ピペットで移しておよび洗浄は精密でなければならない。
8. 試験手順
1) 肯定的な制御のための2つの井戸、否定的な制御のための2つの井戸置かれる取れば、プリコートされたmicroplateを(サンプルの数に従って、別に分解され、使用することができる) 50µl肯定的な制御血清を加えなさいそれへの否定的な制御血清はそれに応じてよくある;他はよくサンプル、第一に40µlサンプル希薄を加えるためにでしたり、そして各井戸に10µlサンプルを加える。ついに、各井戸に50µl酵素の共役を、それを均等に混合するために穏やかに揺れる覆う付着力ホイルで版を、孵化する37の℃ for30分に加えなさい;
2)は各井戸に吸収性のペーパーと乾燥する付着力ホイルを、放棄する井戸の液体を、加える薄くされた洗浄緩衝、300ul/wellを、である30sのために静的、それから放棄する液体を、繰り返す5回のための上記のステップ、ついに折り返しを開ける;
3)は37の℃in darkfor15分に基質の解決、100ul/wellを、均等に混合する付着力ホイルでそれをカバーするためにそれをそして孵化する加える;
4)は停止する反作用を停止するために解決50ul/wellを測定する10分の結果を加える。
9. 結果の判断
450nm (参照として630nm)でELISAの読者とのODの価値を読みなさい。
有効である試金のため:
否定的な制御(N)≥1.0のODの価値、
肯定的な制御(p) ≤0.3のODの価値;
方法を計算しなさい:
否定的な制御(N)= S/N価値のサンプルOD価値/平均ODの価値
結果の解釈
S/N value≥0.5:陰性
S/Nの価値<0>
10. 貯蔵および日付切れるため
暗闇の2~8℃、凍結する無しの満期日の店:12か月。
臨床徴候
1. ほとんどの激しいタイプ
それはヤギで共通である。2日の平均培養時間後で、体温は40-41度に突然、また更に42度、食欲の不況と、直立の毛および損失または消失上がる。同時に、破損およびserous鼻の粘液がある。起こる前に粘膜の口のCatarrhal発火、時々潰瘍、か死。但し、歯mの充血は共通である。最初便秘、そして大きい下痢、しかし血の腰掛け無し。ヒツジの失敗、温度の低下および急死に苦しまれる。病気のコースは5から6日であり、傷病率は100%高い。深刻な発生の場合には、死亡率は100%である;穏やかな場合では、死亡率は50%を超過しない。若いヒツジの性能は高い傷病率および死亡率と厳しい。
2. 激しいタイプ
培養時間は3から4日であり、徴候は最も激しい徴候と同じであるが、病気のコースはより長い、従ってserousおよび粘性鼻ジュースはmucopurulentに回り、鼻孔はすぐに妨げられる。舌、頬、上顎および咽頭の粘膜は潰瘍現われる。そこに頻繁に口内炎を壊死させている。穏やかな場合では、小さく赤く表面的なnecrotic焦点は現われ、厳しい場合で、全口腔は影響される。病気のヒツジはのどが渇いて、食べない。耐久性があるジェット機の下痢は起こる。難しさの呼吸および咳があれば、呼吸の伝染を示す。腟vaginitisは頻繁にmucopurulent分泌と一緒に伴われる雌ヒツジに起こる。妊娠したヒツジにより中絶を引き起こすことができる。病気のコースは8-10日である。一部は並行病気、回復されたいくつかで死に一部は慢性になった。
3. 亜急性か慢性のタイプ
それは激しい段階後に共通である。早い徴候は上でと同じである。口のまわりの小節そしてpurulent傷はおよび鼻孔、またより低いつば伝染性のpurulent傷と容易に混同するこのタイプの後期の特別な徴候である。病気のコースは10-15日である。ヒツジは一般に亜急性プロセスを示し、次に回復するか、または徴候を示さない。
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