魚のエビの蜂蜜の感受性0.01ppb 96Wells/KitのためのNitrofuran AOZのキット テストELISA

魚のエビの蜂蜜の感受性0.01ppb 96Wells/KitのためのNitrofuran AOZ ELISAテスト キット

 

1. 主義

このfoodの安全急速なテスト キットサンプルのAOZの検出のための競争の酵素の免疫学的検定に基づかせている。連結の抗原はマイクロよ縞でプリコートされる。マイクロよ縞でプリコートされる反AOZ抗体のためにサンプルおよび連結の抗原のAOZは競う。酵素の共役の付加が着色のために、TMBの基質加えられた後。サンプルの光学濃度（OD）の価値にそれでAOZの否定的な相関関係がある。この価値は標準的なカーブと比較され、AOZの集中は続いて得られる。

2. 部品

1	マイクロよストリップ	取り外し可能な8の12のストリップ それぞれ井戸
2	6×標準ソリューション（1mLそれぞれ）	0ppb	0.01ppb
		0.03ppb	0.09ppb
		0.27ppb	0.81ppb
3	酵素の共役	7ml	赤い帽子
4	抗体の使用液	7ml	ブルー キャップ
5	基質A	7ml	白い帽子
6	SubstrateB	7ml	黒い帽子
7	解決を停止しなさい	7ml	黄色い帽子
8	20×は洗浄の緩衝を集中した	40ml	白い帽子
9	2×は解決の再溶解を集中した	50ml	透明な帽子
10	2-Nitrobenzaldehyde （C7H5NO3）	10ml	黒い帽子

 

3. 技術仕様

感受性:0.01ppb

孵化の温度:25℃

孵化の時間:30min~15min

検出限界

ティッシュ、卵、蜂蜜:0.05ppb

交さ反応率

AOZ 100%

AMOZ <0>

AHD <0>

SEM <0>

回復率

ティッシュ、卵95±25%

蜂蜜85±23%

 

4. 必要なが、提供されない材料

1) 装置:microplateの読者、プリンター、ホモジェナイザー、窒素乾燥装置、渦、測定する遠心分離機は、バランス（0.01 g）の定温器、湯せんの相互感覚ピペットで移す;

2) Micropipettors:単一チャネルの20-200 µL、100-1000 µLおよび多重チャンネルの30~300 µl;

3) 試薬:NaOHの酢酸エチル、n-Hexane、HCI （おおよその36.5%）、K2HPO4·3H2O

 

5. サンプル前処理

指示

次のポイントはの前処理の前にを種類のサンプル取扱われなければならない:

1) 使い捨て可能な先端だけ実験に使用することができ、異なった試薬を吸収するために使用されたとき先端は変わらなければならない;

2) 実験の前に実験結果と干渉する汚染を避けるために、各々の実験装置はきれいでなければなり、必要ならば再きれいになるべきである。

サンプル前処理の前の解決の準備:

1) 0.1 M K2HPO4:11.4のgをK2HPO4分解しなさい·500mLへの脱イオンされた水の3H2O。

2) 1つのM HCl:100mLに脱イオンされた水で8.6mL HCI （おおよその36.5%）を分解しなさい。

3) 1つのM NaOH:100mLに脱イオンされた水で4g NaOHを分解しなさい。

4) 解決を再溶解する2×concentratedはサンプル再溶解のために使用される1:1の脱イオンされた水と（1mLは解決+ 1mLによって脱イオンされた水の再溶解を集中した）薄くなる。

 

5.1サンプル準備

a）ティッシュ、卵

1) 均質にされたサンプルの1± 0.05gの重量を量りなさい、蒸留水の4mL、0.5mL 1 M HCIを加えれば各管への100µL 2-Nitrobenzaldehyde （C7H5NO3）は2minのために、きちんと揺れる;。

2) 夜（approx16時間）にわたるat37℃を孵化させなさいまたは湯せん（2時間）によってat56℃を孵化させなさい。

3) 各管に5mL 0.1M K2HPO4、0.4mL 1M NaOHおよび6mL酢酸エチルを、30sのための振動加えなさい。

4) 10minのための室温（20-25 ℃）の上の4000r/minの遠心分離機（乳化があるかまたは酢酸エチルの層が3mlのため十分にでなかったり繰り返し孵化させない、10minおよび遠心分離機のための80の℃の湯せんでサンプルを;または速度を増加し、遠心分離機の時を拡張しなさい）。

5) 新しい遠心管への酢酸エチルの層の移動3mLおよび乾燥への50℃で窒素か空気によって蒸発するため。

6) 乾燥した残余を2mL N-hexaneで分解しなさい、薄くされた再溶解の解決の1mL、組合せを30秒、10分の室温（20-25 ℃）の4000 r/minの上のの遠心分離機のためにきちんと加えなさい;層のN-hexane段階を取除きなさい（乳化が、あったり繰り返し遠心分離機にかける、層のN-hexane段階を取除いた後10-20minのための70の℃の湯せんでサンプルを孵化させたり、）。

7) 50に分析のためのより低いののµLを取りなさい。

サンプルの希薄の折目:2

 

b) 蜂蜜

1) 均質にされたサンプル（蜂蜜）の2± 0.05gの重量を量りなさい、蒸留水の4mL、0.5mL 1 M HCIを加えれば各管への100 µL 2-Nitrobenzaldehyde （C7H5NO3）は2minのために、きちんと揺れる;。

2) 夜（approx16時間）にわたるat37℃を孵化させなさいまたは湯せん（2時間）によってat56℃を孵化させなさい。

3) 各管に5mL 0.1M K2HPO4、0.4mL 1M NaOHおよび6mL酢酸エチルを、30sのための振動加えなさい。

4) 10minのための室温（20-25℃）の上の4000r/minの遠心分離機（乳化があるかまたは酢酸エチルの層が3mlのため十分にでなかったり繰り返し孵化させない、10minおよび遠心分離機のための80の℃の湯せんでサンプルを;または速度を増加し、遠心分離機の時を拡張しなさい）。

5) 新しい遠心管への酢酸エチルの層の移動3mLおよび乾燥への50 ℃で窒素か空気によって蒸発するため。

6) 乾燥した残余を2mL N-hexaneで分解しなさい、薄くされた再溶解の解決の1mL、組合せを30秒、10分の室温（20-25 ℃）の4000r/minの上のの遠心分離機のためにきちんと加えなさい;層のN-hexane段階を取除きなさい（乳化が、あったり繰り返し遠心分離機にかける、層のN-hexane段階を取除いた後10-20minのための70の℃の湯せんでサンプルを孵化させたり、）。

7) 50に分析のためのより低いののµLを取りなさい。

サンプルの希薄の折目:1

 

6. ELISAのプロシージャ

6.1 指示

1) 使用の前に室温（20-25 ℃）にすべての試薬およびマイクロよストリップを持って来なさい;

2) 使用の直後の2-8 ℃にすべての試薬を戻しなさい;

3) ELISAの分析の再現性は、大部分は、版の洗浄の一貫性によって決まる。版の洗浄の正しい操作はELISAの急所プロシージャである;

4) 一定した温度の孵化のために、すべてのサンプルおよび試薬は露光量を避けなければなり各microplateはカバー膜によって密封されるべきである。

 

6.2 操作のプロシージャ

1） テスト キットを少なくとも30分の室温（20-25 ℃）に持って来なさい、各試薬が使用の前に均等に混合するために揺れなければならないことに注目しなさい版フレームに必須のマイクロよストリップを入れなさい。未使用のmicroplate、凍っていなかった2-8 ℃の店を、封じ直した。

2） 解決の準備:1:19 （1部20の×によって集中される洗浄の緩衝+脱イオンされた水19部の）の脱イオンされた水が付いている20の×によって集中される洗浄の緩衝の希薄な40mL。または必要とされるに応じて準備しなさい。

3） 番号付け:数サンプルおよび標準ソリューションに従うマイクロ井戸;各サンプルおよび標準ソリューションは記録する位置を正副2通りに行われるべきである。

4） 別の重複した井戸にサンプルまたは標準ソリューションの50 µLを加えなさい;50 ulの酵素が各井戸に抗体の使用液の50 µLを穏やかに活用する、組合せを版を手動で揺することによって加えなさい。カバー膜を搭載するmicroplate、25 ℃のandincubateをfor30min密封しなさい。

5） 吸収性のペーパーで乾燥するために液体をmicrowell、折り返しから注ぎ、15-30 sのためのmicroplateを洗浄するために洗浄の緩衝の250 µL/wellを加え、次に取り、そして吸収性のペーパーと乾燥するためにはためかしなさい4-5回を繰り返しなさい。泡がはためくことの後にあれば（、きれいな先端とのそれらを切った）。

6） 着色:次に各井戸に基質Bの基質Aの50 µLをおよび50 µL加えなさい。版を手動で揺することによって穏やかに混合し、そして25 ℃で着色のための暗闇でfor15min孵化させなさい。

7） 決定:のµLが各井戸に解決を停止する50を加えなさい。版を手動で揺することによって穏やかに混合しなさい。あらゆる井戸のODの価値を定めるために450nmでmicroplateの読者の波長を置きなさい。（5分以内の二波長450/630nmでODの価値を読むことを推薦しなさい）。

 

7. 結果の判断

結果を判断する2つの方法がある:最初の1つは第2は量的な決定であるが、荒い判断である。サンプルのODの価値にAOZの集中の否定的な相関関係があることノート。

7.1質的な決定

AOZの集中範囲（ng/mL）は標準ソリューションのそれとサンプルの平均ODの価値を比較することから得ることができる。、サンプルⅡのそれは1.0Ⅰであり、標準ソリューションのODの価値をサンプルのODの価値が0.3であること仮定することは次のとおりである:0ppbのための2.243は、0.01ppbのための1.816、0.03ppbのための1.415、0.09ppbのための0.74、0.27ppbのための0.313、0.81ppbのための0.155、それに応じてサンプルⅠの集中範囲0.27ppbへ0.81ppbであり、サンプルⅡのそれは0.03ppbへ0.09ppbである。

7.2量的な決定

吸光度の価値の平均は最初の標準ソリューション（0の標準）のODの価値（B0）で分けられ、続いて100%までに、すなわち増加する得られる、サンプルおよび標準ソリューションの平均ODの価値（b）のために

 

吸光度の価値のパーセント=	B	×100%
	B0

 

サンプルまたは標準ソリューションのB-the平均OD価値

0 ng/mLの標準ソリューションのB0-the平均OD価値

Y-およびＸ軸として標準ソリューションの吸収のパーセントおよびAOZの標準ソリューション（ng/mL）のsemilogarithmの価値の標準的なカーブを、それぞれ引きなさい。標準的なカーブに吸収のパーセントを組み込むことによって標準的なカーブからのサンプルの対応する集中を読込みなさい。生じる価値は最終的にサンプルのAOZの集中を得る対応する希薄の折目によって続いて、増加する。

 

8. 注意

1） 25 ℃の下の室温か室温（20-25 ℃）に戻らないより低い標準的なODの価値を試薬およびサンプルの温度はもたらす。

2） 洗浄プロセスのmicroplateの乾燥は非線形標準的なカーブおよび望ましくない再現性を含む状態と一緒に伴われる;従って洗浄の直後の次のステップに進みなさい。

3） 均等に混合しなさい、さもなければ望ましくない再現性がある。

4） 停止解決は2つのMの硫酸の解決、皮と連絡することを避けるである。

5） 満期日を超過するキットを使用してはいけない。キットからの薄くされるか、またはadulterated試薬の使用は感受性および検出ODの価値の変更をもたらす。使用するために異なったロットのキットからの試薬を交換してはいけない。

6） それを封じ直すために自動シーリング袋に未使用のmicroplateを入れなさい。前の標準ソリューションおよび無色色は感光型であり、こうしてライト--に直接さらすことができない。

7） この解決の退化を示すあらゆる色の着色の解決を放棄しなさい。標準ソリューション1 （0のppb）の検出の価値はのより少しにより0.5退化を示す。

8） 最適反作用の温度は25 ℃であり、余りに高いですか余りに低温は検出の感受性およびODの価値の変更で起因する。

 

9. 貯蔵および満期日

貯蔵:凍っていない2-8 ℃の店。

満期日:12か月;生産の日付は箱にある。

注:microplateの真空パックに漏出があれば、使用するためにまだ有効影響を与えない試験結果に、使用するために緩むことであるである。

 

 

Q1:あなたは出荷するためにどの位の時間を要するか。
A1:通常7仕事日以内の船。

 

Q2:OEM/ODMを支えるか。
A2:支えることができる。私達はあなたの特定の必要性および特定の量に従ってカスタマイズしてもいい。

 

Q3:あなたの工場はいかに品質管理の点ではしているか。
A3:私達にISO9001証明があり、ISO13485証明、これまでのところすべての工程、標準的な規則がある、私達は政府の関連した行動そして法律に従う。

 

Q4:売り上げ後のサービスは保証されるか。
A4:私達は専門のオンライン技術的な売り上げ後のサービスを提供する。プロダクトが実験の間に失敗すれば、私達は提供してもいい
電話、ビデオおよび他の形態を通した1対1の指導。

 

Q5:あなたの最低順序量は何であるか。
A5:1Kit.

 

Q6:出荷方法は何であるか。
A6:それは明白によって（FEDERAL EXPRESS、UPS、DHL、EMS、等）または空気および地面によって出荷することができる。順序を置く前に私達と確認しなさい。